PCR試劑盒
它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增巴斯德氏桿菌屬，與其他微生物沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
規(guī)格及成分
成分 | 編號(hào) | 十孔盒包裝 |
PCR MagicMix 3.0 | 試劑一 | 1 mL（紅蓋） |
超純水 | 試劑二 | 1 mL（亮黃色） |
巴斯德氏桿菌屬PCR引物混合液 | 試劑三 | 100 μL（白蓋） |
巴斯德氏桿菌屬PCR 陽性對(duì)照 （1×10E8 拷貝/μL） | 試劑四 | 50 μL（黃蓋） |
核酸釋放劑（試用裝） | 試劑五 | 20 次（1 mL，綠蓋） |
使用手冊(cè) | 試劑六 | 1 份 |
運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。
自備試劑：樣品 DNA。
PCR試劑盒使用方法：
一、樣品 DNA 的制備
1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送20 次核酸釋放劑試用裝，其使用手冊(cè)可以從本公司網(wǎng)站訂購核酸釋放劑。
2. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 補(bǔ)骨脂 PCR 陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）
3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：
成分 | N+2 個(gè)樣品管 | PCR 陰性對(duì)照 | PCR 陽性對(duì)照 |
PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
巴斯德氏桿菌屬PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 個(gè)樣品 DNA 模板 | 各 18 μL | -- | -- |
PCR 陰性對(duì)照（水） | -- | 18 μL | -- |
PCR 陽性對(duì)照（巴斯德氏桿菌屬PCR陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋液） | -- | -- | 18 μL |
4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：
過程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反應(yīng)（35 個(gè)循環(huán)） | 95℃ | 15 sec |
57℃ | 15 sec | |
72℃ | 40 sec | |
后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、電泳檢測(cè)
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對(duì)照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí)驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。
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