HPLC 柱前衍生法分析 B1

（AFT）對有機(jī)體具有致突、致癌、致畸性，被列為可能的人體致癌物質(zhì)。 在多種人類食物中被發(fā)現(xiàn)，如玉米、堅(jiān)果、花生等等，以 B1、B2、G1、G2 的形式存在。AFTB1 在動物體內(nèi)可轉(zhuǎn)變成兩 種主要代謝產(chǎn)物- AFTM1 和 AFTQ ,前者的毒 性和致癌性與AFTB1相近,主要存在于動物 的尿和乳汁中。

可使用正相和反相液相色譜法分離，反相色譜法操作較容易、流動相毒性也較低，被廣泛采用。使用反相液相色譜檢測時(shí)，可通過柱前衍生法或柱后衍生法，提高AFTB1 、AFTG1的檢 測靈敏度 ，使之與 AFTB2、AFTG2 在相近水平下檢測。柱前衍生法無需專用柱后衍生反應(yīng)系統(tǒng)，方法簡單。本方法通過三（TFA）柱前衍生，HPLC 檢測 B1。該方法可用于 4 種 B1、B2、G1、G2 同時(shí)檢測，也可用于 AFTM1 檢測。

樣品前處理

取 50μL B1 標(biāo)樣溶 液 (10ng/mL，溶劑苯-乙腈溶液(98:2 v/v))，用氮?dú)獯蹈?，加?00μL正己烷和100μL三， 混勻1min，室溫下放置10min，氮?dú)獯蹈桑靡译嫠芤?乙腈/水 85：15 v/v) 50μL重新溶 解，混勻30s，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，供液相色譜儀檢測用。

■ LC 分析條件

儀器：Shimadzu LC-20A 液相色譜系統(tǒng)（含 LC-20AT 二元泵、CTO-20A 柱溫箱，RF-10AXL熒光檢測器，LCsolution 色譜工作站）

色譜分析條件

流動相：甲醇:乙腈:水=1:3:6

流速 ：1.0mL/min

色譜柱：Shim-pack GVP-ODS (4.6mm*10mm)；

Shim-pack VP-ODS (4.6mm*150mm,5μm) 激發(fā)波長 365nm

發(fā)射波長 425nm 柱溫：40℃ 進(jìn)樣量：10μL

■ 分析結(jié)果

B1（AFTB1）標(biāo)樣色譜圖及分析結(jié)果

表 1 B1 分析結(jié)果

■ 結(jié)論

三柱前衍生法可用于 AFTB1 檢測，增強(qiáng)其熒光強(qiáng)度，提高檢測靈敏度。通過以上實(shí)驗(yàn)檢測 AFTB1 標(biāo)樣（10ng/mL），未經(jīng)衍生標(biāo)液的信噪比為 42，衍生后信噪比提高至S/N=1434