一、培養(yǎng)體系問題

1、檢查細(xì)胞是否存在污染。

(1)如果培養(yǎng)細(xì)胞時未添加抗生素，細(xì)胞污染則是不可避免的。

①用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查。

②如果細(xì)胞被污染則要棄掉。

(2)支原體污染不易察覺，因此需要進(jìn)行定期檢測。

(3)檢查可能造成污染的途徑和原因。

2、檢查用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基和血清(例如批次廠商是否相同)。

3、如果排除問題與培養(yǎng)基無關(guān)，那么可能還是細(xì)胞存在問題。

(1)復(fù)蘇另一支凍存的細(xì)胞，與正在培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行比較。但是需要注意的是兩種細(xì)胞的培養(yǎng)應(yīng)分開，以免在培養(yǎng)之初就產(chǎn)生污染。隨后按步驟(2)～(4)的方法做排查。

(2)對傳代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，并繪制生長曲線，與前面培養(yǎng)該細(xì)胞的資料進(jìn)行比較，檢查是否存在如下改變：

①傳代時是否存在接種密度過低的情況。

②細(xì)胞傳代是否過于頻繁。

③傳代前細(xì)胞平臺期是否過長。

(3)是否更換了或其他分離劑的批次，檢查供應(yīng)商和批次。

(4)細(xì)胞分離過程中是否出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷細(xì)胞的情況：

①(或其他消化試劑)的消化時間是否過長。

②消化液的濃度和活性是否過高、過強(qiáng)。

③消化時，孵箱溫度是否正常。

④吹打消化細(xì)胞時是否過于用力。

⑤如果添加了EDTA，那么細(xì)胞是否對 EDTA過于敏感。

⑥稀釋是否正確。

⑦消化液是否還在有效期內(nèi)。

二、檢查公用設(shè)備和試劑

1、孵箱溫度設(shè)定不準(zhǔn)

a、自動調(diào)溫器損壞。

b、開關(guān)孵箱門過于頻繁。

c、孵箱門未關(guān)緊。

d、風(fēng)扇損壞造成散熱不均。

2、孵箱濕度不能維持

a、水盤中未加水。

b、孵箱有滲漏。

c、開關(guān)孵箱門過于頻繁。

d、在培養(yǎng)皿中放置一定量的PBS，每日稱重，以檢查蒸發(fā)率。

3、孵箱的CO₂濃度不準(zhǔn)

a、開關(guān)孵箱門過于頻繁。

b、CO₂控制器出現(xiàn)問題。