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高效液相色譜法測(cè)定鐵皮石斛中的甘露糖

2025年02月24日 09:15:20      來(lái)源:上海三為科學(xué)儀器有限公司 >> 進(jìn)入該公司展臺(tái)      閱讀量:2

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【鐵皮石斛】
鐵皮石斛為蘭科植物鐵皮石斛 Dendrobiumoffi---cinale Kimuraet Migo 的干燥莖,具有益胃生津,滋陰清熱之功效,因其特殊的生存環(huán)境和的滋補(bǔ)功效名列“中華九大仙草”。由于石斛藥材在化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)組織上具有一定相似性,使鑒定和質(zhì)量評(píng)價(jià)工作較困難。目前常用的方法之一是高效液相色譜法,《中國(guó)藥典》2015 部規(guī)定:供試品色譜中,甘露糖與葡萄糖的峰面積比應(yīng)為(2.4~8.0);所采用高效液相色譜的理論塔板數(shù)按甘露糖峰計(jì)算應(yīng)不低于4000;按干燥品計(jì)算,含甘露糖(CHO)應(yīng)為(13.0~38.0)%。
【樣品制備】
(校正因子計(jì)算) 取適量,配置成 1ml 含 12mg 的溶液,作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取甘露糖對(duì)照品置于容量瓶中,加入內(nèi)標(biāo)溶液,加水適量使溶解并稀釋至刻度,搖勻,吸取 400μl,加 入 PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)甲醇溶液與氫氧化鈉溶液各 400μl,混勻,加熱水 浴反應(yīng)。再加鹽酸溶液混勻,用洗滌,棄去液,水層離心后,取上清液 10μl,注入測(cè)定,計(jì)算校正因子。
(鐵皮石斛樣品制備)取本品粉末 0.1219g,置提取器中,乙醇加熱回流提取,棄去乙醇液,藥淹揮干乙 醇,濾紙筒拆開(kāi)置于燒杯中,加水再加入內(nèi)標(biāo)溶液,攪拌下煎煮小時(shí),室溫加水、混勻,離 心,吸取上清液適量置頂空瓶中,加鹽酸溶液、封口,混勻、水解、放冷,用氫氧化鈉溶液 調(diào)節(jié) pH 值至中性,取上清液注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。

 

【色譜條件】

液相色譜:sanotac LC1200高效液相色譜,色譜柱:kromasil C18柱

緩沖液:0.02mol/L 乙酸銨溶液
流動(dòng)相:乙腈:緩沖液=20:80
流速:1.0ml/min;
進(jìn)樣量 20μL;
柱溫:室溫;
檢測(cè)波長(zhǎng):250nm

【結(jié)果分析】
對(duì)譜圖進(jìn)行積分,輸入內(nèi)標(biāo)物含量及甘露糖含量,由sanotac操作軟件直接獲取校正因子見(jiàn)下表:
組分名保留時(shí)間峰面積峰高濃度 (mg/ml)校正因子
甘露糖對(duì)照品14.34932946483100.0980.5944
PMP15.842577415741  
內(nèi)標(biāo)物19.141118490418830.12

對(duì)譜圖進(jìn)行積分,輸入內(nèi)標(biāo)物含量及甘露糖含量,由色譜軟件直接獲取甘露糖濃度見(jiàn)下表:

組分名保留時(shí)間峰面積峰高理論塔板數(shù)濃度 (mg/ml)
甘露糖14.362098964107425133780.2268
PMP15.921628633545  
內(nèi)標(biāo)物19.141087723378850.12 
葡萄糖28.3443446412686  

 
經(jīng)計(jì)算該鐵皮石斛樣品中甘露糖的含量為 18.61%,結(jié)果符合《中國(guó)藥典》2015 部“按干燥品計(jì)算,含甘露糖(CHO)應(yīng)為(13.0~38.0)%”的要求。

 

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